分光光度计原理

知识点：《分光光度计原理》 收集：席冠系 编辑：月季姐姐
本知识点包括：1、试从原理和仪器两个方面比较原子吸收分光光度法与... 2、分光光度计的工作原理？ 3、有谁知道荧光分光光度计的原理? 4、原子吸收分光光度计原理 5、原子吸收分光光度计的原理 。

《分光光度计原理》相关知识

透明液体的颜色由所吸收（透过）的光的波长和吸收量的不同而显示不同的颜色和深度,通过检测一定厚度该溶液的吸收波长和吸收量,可以判断溶液中电解质的种类和浓度.紫外可见分光光度计可以在可见光和紫外光光谱之间工作,发射器定强度、定波长发射出的光线在通过等厚度的玻璃皿后,接收器所接收到的强度会有所减弱,通过计算减弱的比例,可以判定溶液的浓度；而通过连续波谱吸收扫描可以大致判断玻璃皿中的溶液的最大特征吸收波长,从而大致判断溶液中可能含有的物质的特征.

知识拓展：

1： 紫外可见分光光度计的使用我使用的仪器型号是UV-2550,是双通道的,我想问一下,在两个比色皿中分别放入参比溶液（水）和待测溶液,是不是得到的测试结果就是以水为参比的溶液吸收值呢,换

这是你还没有完全理解双通道紫外可见分光光度计的原理.其实最根本的原理同普通的分光光度计是一样的,为什么设置双通道,是因为其中一个通道是拿来放空白样的,也可以说是参比样.操作的时候,首先是将两个比色皿都充满空白液,用其中一个为基准调零,然后再测另一个比色皿,记下读书,这个是空白0对应的吸光度值,也就是由于比色皿不同带来的误差,在作图的时候是要算进去的.然后,把那个认为是样品的比色皿里的空白液换成真正的样品,测量其吸光度值.

通过双通道,可以避免比色皿不同带来的误差,所以比普通的光度计要精确些.

具体,参见书本.

2： 原子吸收分光光度计.紫外分光光度计和红外的基本原理是什么如题

1.原子吸收是利用原子或者离子外层电子对特定波长的光可以吸收,从而发生能级跃迁的原理.因为不同原子或者离子的不同的电子跃迁要吸收特定波长的光,所以发射光经过分光以后形成的单色光如果被吸收,则溶液中含有特定的原子或者离子.吸收的强度可以用来标定溶液的浓度.

2.紫外分光光度计的原理利用分子轨道上电子的能级跃迁.分子轨道上的电子能级跃迁也要吸收一定波长的光.因而将入射光分光以后检测吸光的波长和吸光强度就可以用来定性和定量分析含有什么分子.

3.利用的是分子轨道上电子的振动和转动能级的跃迁.一般只用来定性分析,定量分析效果不好.原理就是说分子轨道上电子的振动和转动能级的跃迁要吸收特定波长的光.

3： 原子吸收分光光度计进行定量分析的原理是什么?与紫外可见分光光度计有什么不同?怎样求出待测样品速效K含量,并评价速效K的供应水平.主要是实验公式速效K的含量=比色液ppm*液土比如何

原子吸收观察的是构成物质的元素（或曰原子）中的电子在原子轨道中的跃迁；而紫外可见光吸收观察的是构成物质的分子中的电子在分子轨道中的跃迁.两者有所同,有所不同.定量分析的原则同,而测量所需的光能量不同：原子吸收为X光,能量大,可激发电子从低的原子轨道向高的原子轨道跃迁；而紫外可见吸收为紫外光及可见光,能量小,只能激发电子从分子轨道向最低（或次低）的空的分子轨道跃迁.速效K顾名思义为一农药,检测应该用紫外可见光光谱,如果是复杂样品,建议考虑液谱.浓度定量测定请使用标样做标准曲线做参照.

4： 紫外分光光度计与紫外可见分光光度计的区别是什么?同一种方法用不同的仪器去检测，这差别不大吗？我只用过7211、722型分光光度计。

紫外分光光度计与紫外可见分光光度计的区别在于：

紫外可见分光光度计测量的范围大些,由于各种不同光波发射的灯管不同,紫外和可见光所用就不同.

一般紫外分光光度计量程在200nm->500~600nm间（包括部分可见光）；

可见分光光度计在340nm~1000nm；

紫外可见分光光度计就可以调节200nm~1000nm了.

同一种方法用不同的仪器去检测,误差是很大的,几乎能达到5%；而且用同一种仪器在不同空间和时间下测量的数据误差也能达到1%.但是测量后经过各自的空白校正,相信误差不会超过1%,所以用不同的仪器测的数据整理后是可以通用的,但是没有经过空白校正的数据不能互相代替.

PS：用紫外分光时一定要用石英比色皿,不能用玻璃比色皿,因为紫外线很难透过玻璃的.

5： 【紫外分光光度计的使用步骤是什么?】

仪器名称：紫外/可见分光光度计系统

使用方法：开机步骤

1 开光谱仪电源

2 开计算机电源

3 在文件管理器中用鼠标指按UV WinLab图标,此时出现UV WinLab的应用窗口,仪器已准备好,可选用适当方法进行分析操作.

2 方法：在分析中必须对分光光度计设定一些必要的参数,这些参数的组合就形成一个“方法”.Lambda系列UV WinLab软件预设四类常用方法.

1）扫描（SCAN）,用以进行光谱扫描.

2）时间驱动（TIME DRIVER）,用以观察一定时间内某种特定波长处纵坐标值的变化,如酶动力学.

3）波长编程（WP）用以在多个波长下测定样品在一定时间内的纵坐标值变化,并可以计算这些纵坐标值的差或比值.

4）浓度（CONC）用以建立标准曲线并测定浓度.

2.1 进入所需方法,在方法窗口中选择所需方法的文件名.

2.2 方法的设定

2.2.1 扫描、波长编程及时间驱动

各项方法可根据显示的参数表,逐项按需要选用或填入,并可参考提示.

2.2.2 浓度

浓度方法窗口下方标签较多,说明做浓度测定时需要参数较多.用鼠标指按每一标签,可翻出下页,其上有一些需要测定的参数.必须逐页设定.

3 工具条

3.1 SETUP

当所需的各项参数都已在参数中设好后,必须用鼠标指按SETUP,才能将仪器调整到所设状态.

3.2 AUTOZERO

用鼠标指按此键,分光光度计即进行调零（在光谱扫描中则进行基线校正）.

3.3 START

用鼠标指按此键,光度计即开始运行所设定的方法.

4 方法运行

4.1 扫描,时间驱动,波长编程

方法选好后,先放入参比溶液,按AUTOZERO键,进行自自动校零或背景校正结束后再放入样品,按START,分光光度计即开始进行,同时屏幕上出现图形窗口,将结果显示出来.

4.2 浓度

4.2.1制订标准曲线

1 方法选好后,确认各项数据正确,特别是REFS页中第一行要选中右上角的“edit mode”.再放入参比溶液,按AUTOZERO键自动校零或背景校正.

2 按setup,待该图标消失后,再按“start”,按提示依次放入标准色列的各管溶液,每次都按提示进行操作.

3 标准色列测定

完毕后,屏幕上出现calibgraphwindow,显示拟合的标准线,并标出各项标准管的位置,屏幕下方还有一条Concentration mode的对话框,可以用来修改拟合的曲线类型（按 change calbration）,或修改标准溶液的任何一管（replace）,或取消某一管（delete）,或增加标准溶液管数（add）.如过已经满意,则按analyse sample键,进入样品测定窗口.

4 标准曲线有关的各项数据,均在calibresultwindow中,可用鼠标将其调出观察.其中包括每个标准溶液的具体数据,标准曲线的回程方程式,相关系数,残差.

4.2.2样品浓度测定

4.2.2.1刚制定好的标准曲线接着进行样品浓度测定时

1 只需在concentration mode对话框按analyse sample键,进入样品测定窗口.

2 按设定的样品顺序放入各样品管,每次按提示进行操作.

3 屏幕上出现结果窗口,结果数据将依次显示在样品表中的相应位置.

4.2.2.2利用原有的标准曲线接着进行样品浓度测定时

4.2.2.2.1 调出所测定样品的浓度方法文件,首先调出refs页,将原设edit mode选项取消,改设左上角的using exiting

calibration.重新将方法存盘,则今后再调用时即不需再作修改.

4.2.2.2.2 在sample页中按要求重设各种样品名称机样品信息.

4.2.2.2.3 按工具条中setup键,将主机设到该方法所设定的条件.

4.2.2.2.4 将参比溶液放入比色室,按autozero键做背景校零.

4.2.2.2.5 按start键,按设定的样品顺序放入各样品管,每次按提示进行操作.

4.2.2.2.6 屏幕上出现结果窗口,结果数据将依次显示在样品表中相应位置.

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4：原子吸收分光光度计原理

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