凝胶色谱

知识点：《凝胶色谱》 收集：邰谱凡 编辑：茉莉花仙子
本知识点包括：1、凝胶色谱法和电泳的区别是什么？都可以测DNA吗？ 2、凝胶柱色谱 怎么用，上样，洗脱溶剂的选择，接流份... 3、凝胶色谱法的凝胶种类及性质 4、凝胶色谱法的两大分类 5、高效液相色谱与高效凝胶色谱是一回事吗 。

《凝胶色谱》相关知识

原理是,蛋白质分子是带电分子,在固定电场下,带电体会发生运动.想象一下,在受到同等动力和阻力情况下,是不是越重的分子移动速度越慢啊,这样在固定时间内就可以把相对分子质量不同的蛋白质分子分离开来了.严格意义上讲,化学中“分子大小”这个术语是不应该出现的,因为这个称呼是告诉别人分子体积大,还是相对分子质量高呢?所以,用相对分子质量来说更加准确科学.

参考思路：

相对分子质量大小是指一种蛋白质上所有原子的相对原子量之和，而分子大小则是指蛋白质分子的体积大小。一般情况下相对分子质量大的蛋白质分子大小也大。所以我认为区别很小。

知识拓展：

1： 【凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是（）A、蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小B、蛋白质相对分子质量的大小C、蛋白质所带电荷的多少D、蛋白质溶解度的大小】

B.

A是亲和层析,

C是等电聚焦

D是盐析、盐溶

仅供参考.

2： 【凝胶层析法为什么能测出蛋白质的分子量?原理是什么?】

原理简单说就是分子量不同通过凝胶柱的速度也不同

凝胶是一种具有多孔,网状结构的分子筛.利用这种凝胶分子筛对大小,形状不同的分子进行层析分离,称凝胶层析 .

凝胶层析的应用范围:

凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质,酶,多肽,激素,多糖,核酸类等物质.分子大小彼此相差25%的样品,只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开.利用凝胶的分子筛特性,可对这些物质的溶液进行脱盐,浓缩,去热源和脱色.

凝胶层析的优点

凝胶层析具有设备简单,操作方便,分离迅速及不影响分子生物学活性等优点.目前已被广泛应用于各种生化产品的分离和纯化.

-,凝胶层析的基本原理

凝胶层析的原理

l 分子大小不同混合物上柱; 2 洗脱开始,小分子扩散进人凝胶颗粒内,大分子被排阻于颗粒之外;3 大小分子分开: 4大分子行程较短,已洗脱出层析柱,小分子尚在进行中

凝胶是一类多孔性高分子聚合物,每个颗粒犹如一个筛子.当样品溶液通过凝胶柱时,相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的孔隙,随着溶剂流动,因此流程较短,向前移动速度快而首先流出层析柱;反之,相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔,可自由地进出凝胶颗粒的网孔,在向下移动过程中,它们从凝胶内扩散到胶粒孔隙后再进入另一凝胶颗粒,如此不断地进入与逸出,使流量增长,移动速率慢而最后流出层析柱.而中等大小的分子,它们也能在凝胶颗粒内外分布,部分进入颗粒,从而在大分子物质与小分子物质之间被洗脱.这样,经过层析柱,使混合物中的各物质按其分子大小不同而被分离.

3： 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的分子量,为什么有时和凝胶层析法所得结果有所不同?是否所有的蛋白质都能用SDS-凝胶电泳法测定其分子量?为什么?

两种方法原理不同,有差异是正常的.如果差距较大,要仔细分析.

一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基（肽链）分子量.

凝胶层析与分子形状有关,一般marker都是球状蛋白,所以测球状蛋白分子量较准.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与分子形状无关.

有些蛋白性质特殊,不适于用SDS-凝胶电泳法测定.比如结构特殊的,如胶原；带很多电荷的,如组蛋白；带有较大辅基的,如糖蛋白.

4： 纸层析法的原理?

纸层析法又称纸色谱法.以纸为载体的色谱法.固定相一般为纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等.将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行.当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点.将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置.根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较,进行定性.用斑点扫描仪或将组分点取下,以溶剂溶出组分,用适宜方法定量（如光度法、比色法等）.在环境分析测试中,有时用纸层析法分离试样组分,它用于一些精度不高的分析,如3,4-苯并芘.但不如GC、HPLC应用普遍.

5： 比较SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶层析法分离蛋白质的异同点

两种方法原理不同,有差异是正常的.如果差距较大,要仔细分析.一般凝胶层析是非变性的,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是变性的,二硫键也被还原,所以是亚基（肽链）分子量.凝胶层析与分子形状有关,一般marker都是球状蛋白,所以...

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