ms培养基
发布日期：2019-04-21 12:10:00编辑：音乐人
知识点：《ms培养基》 收集：饶诙畔 编辑：百合仙子
本知识点包括：1、MS培养基的计算题，求助。 2、MS培养基中的MS什么意思 3、B5培养基与MS培养基的区别 4、ms培养基母液肌醇的扩大倍数为10倍，配制ms培养基5... 5、MS培养基配方的配制步骤 。
《ms培养基》相关知识
你要培养什么?基本培养基的种类有很多
参考思路：
是MSN培养基吧？我现在正在做这个。以配一升为准， 需要 苹果酸 4g, 酵母粉6g,； 磷酸缓冲溶液 100ml, MgSO4 0.25g, NH4Cl 1g ， CaCl2 0.01g 。 约加2.2g NaOH 可以把pH 调到6 若需要配固体培养基则加琼脂粉 12g
知识拓展：
1： MS培养基的配制与灭菌
知识要点归纳：
植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基.MS培养基的配制包括以下步骤.
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液.这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液.现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用.
大量元素(母液Ⅰ) mg／L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液.
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液.其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L.
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5?5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中.
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中.
MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6?苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0?1 mg/mL).其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0?1 mg/mL的母液.
配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL.再取2,D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中.
配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错.
溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状.然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀.
需要注意的是,在加热琼脂、制备培养基的过程中,操作者千万不能离开,否则沸腾的琼脂外溢,就需要重新称量、制备.此外,如果没有搪瓷量杯,可用大烧杯代替.但要注意大烧杯底的外表面不能沾水,否则加热时烧杯容易炸裂,使溶液外溢,造成烫伤.
调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(5?0)测培养基的pH,一直到培养基的pH为5?8为止(培养基的pH必须严格控制在5?8).
培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装.分装时,先将培养基倒入烧杯中,然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中.注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上.锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5～1/4.每1 000 mL培养基,可分装25～30瓶.
培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口.用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm×9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口,并用线绳捆扎.最后在锥形瓶外壁贴上标签.
高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤.
第一,码放锥形瓶.将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中,再放入高压蒸气灭菌锅内.如果没有金属小筐,可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开.
第二,放置其他需要灭菌的物品.将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口),用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等.
第三,灭菌.待需要灭菌的物品码放完毕,盖上锅盖.在98 kPa、121.3 ℃下,灭菌20 min.
灭菌后取出锥形瓶,让其中的培养基自然冷却凝固.最好放置1 d后再使用.
2： 【MS植物培养基的配置过程中6-苄基嘌呤（6BA）是什么时候加入到培养基中?】
知识要点归纳：
以前我们好像是配制时就加了,然后分装灭菌.
3： 在配制培养基的过程中应该注意哪些问题?为什么
知识要点归纳：
1、培养基配方的选定
不用多说了吧,培养什么植物,用什么基础培养基,用什么激素,比例什么的
2、培养基的制备记录
实验记录...
3、培养基成分的称取
当然要乘凉准确了
4、培养基各成份的混合和溶化
各种成分之间,有可能会发生反应,一般是分开溶解的,如果是粗放型实
验,另当别论了
5、培养基pH的初步调正
植物生长pH至关重要,一般是5.6,同时 pH值也关系着培养基的凝固程
度.
6、培养基的过滤澄清
7、培养基的分装、灭菌
这得根据你培养基的成分来定你的灭菌条件,比如容易碳化,你可以降低
温度,提高时间来达到相同的效果
8、培养基的保存
一般都要放在5-8℃冰箱中
4： 关于配制MS培养基中激素浓度换算的问题现要配制1000mL的MS培养液,其中里面NAA激素的浓度是1mg/L,我现在有母液浓度是1mg/mL的NAA激素的母液,问需要加入母液多少?(我算的是1mL,别人算的是0.1mL).请
知识要点归纳：
1mg/ml是1mg/L的一千倍,所以配1000ml加1ml母液就对了,稀释一千倍.
5： 【求MS培养基的配制步骤,需要详细点的介绍,】
知识要点归纳：
激素母液的配制
各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容.一般取100mg配成100ml母液.
2、配制培养基
以配置1L MS培养基为例,按顺序进行如下操作：
1、先在烧杯中放入一些蒸馏水.
2、分别取MS中的母液10ml倒入.
3、一般称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解.
4、加蒸馏水用量筒定溶至1L.
5、按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素对组培植物的生长至关重要.所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,减少误差.
6、用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8.（有条件的话使用酸度计,比较精确） 可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值.
1当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液.
1当量NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液.
7、称取5g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热至沸腾,直到琼脂粉熔化.
8、稍微冷却后,分装入培养容器中.无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧.
9、放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌20分钟左右.
10、灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固.
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