电泳

概括：这道题是丰估吓同学的课后生物练习题，主要是关于电泳，指导老师为冉老师。电泳缓冲液是核酸、蛋白质凝胶电泳系统的一个重要组成， 是电泳场中的导体，也是维持电泳系统恒定 pH值的必要条件。其成分及其离子强度影 响物质的电泳迁移率，应避免与被分离的样 品发生化学反应而改变样品的理化性质或使 其丧失生物活性。电泳缓冲液中的EDTA 可螯合Mg离子等二价阳离子，防止电泳时激 活DNA酶及Mg离子与核酸生成沉淀。

题目：电泳

主要注意一下几点：

凝胶正负极不要弄反向了,

控制电压及电泳时间,严控条带跑出

点样时,点样量不要溢出点样孔,注意枪头捅破点样孔的凝胶.

电泳时需要marker做对照,用于验证目拟标片段的大小,

电泳缓冲液需定期更换

相信做到以上几点,应该问题不大

参考思路：

电泳涂装我知道，是这个吗？

举一反三

例1： 蛋白质电泳制胶要注意哪些方面[语文练习题]

总结平时的实验经验,大概需要注意以下几条：

1.玻璃板需要清洗干净,不然蛋白质在凝胶中电泳会受到阻碍.一般用软布在自来水下清洗后用蒸馏水洗一下,或者直接偷懒的办法就是拿酒精棉球擦擦.

2.确保制胶所用试剂有效.

3.根据你的目的蛋白分子量确定胶的浓度.

一般采用如下：

蛋白分子量大小（kd） 凝胶百分比(10%)

4-40 20

12-45 15

10-70 12.5

15-100 10

25-200 8

4.水封：一定要注意缓慢加入水,不然由于冲的厉害,很容易最后胶不平.好的办法就是用乙醇封.

5.由于梳子质量问题,两边的“耳朵”容易断掉,这样两边的孔容易漏出,建议插梳子以后在梳子的上方再多加一些浓缩胶.

乐研生物,

例2： 电泳做凝胶回收时应注意哪些细节?我要做dna胶回收,查到一些方法,但是一些技术上的问题写的不清楚,希望能得到一些有价值的建议.以提高胶回收的效率[生物练习题]

DNA胶回收,应该就是琼脂糖电泳的吧?首先要确定方法,是试剂盒还是自己配的试剂,试剂盒的话有protocal,照着做就是了,自己配的呢操作流程也跟试剂盒差不多,基本上都是切胶--加热溶解--上柱结合--洗涤杂质--去离子水洗脱 其次需要注意的就是相对应的几个环节呢,首先电泳缓冲液一定要是新的,保证所用的器具的洁净,包括刀片,避免污染,倒的胶尽量比平时厚,保证样品全部上完,其次避免紫外的长时间照射,切胶的时候尽量少切胶,上柱结合的时候洗涤液一定要记得加酒精,洗涤后多敞洗脱液一般用去离子水30-50ul,可以洗两次.

例3： 使用醋酸纤维素薄膜电泳的注意事项,[生物练习题]

1、醋酸纤维素薄膜的预处理

　　市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片,薄膜的浸润与选膜是电泳成败的重要关键之一.将干膜片漂浮于电极缓冲液表面,其目的是选择膜片厚薄及均匀度,如漂浮15s—30s时,膜片吸水不均匀,则有白斑点或条纹,这提示膜片厚薄不匀,应舍去不用,以免造成电泳后区带扭曲,界线不清,背景脱色困难,结果难以重复.由于醋酸纤维薄膜亲水性比纸小,浸泡30min以上是保证膜片上有一定量的缓冲液,并使其恢复到原来多孔的网状结构.最好是让漂浮于缓冲液的薄膜吸满缓冲液后自然下沉,这样可将膜片上聚集的小气泡赶着走.点样时,应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去,以免缓冲液太多引起样品扩散.但也不能吸得太干,太干则样品不易进入薄膜的网孔内,而造成电泳起始点参差不齐,影响分离效果.吸水量以不干不湿为宜.为防止指纹感染,取膜时,应戴指套或用镊子.

2、缓冲液的选择

醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥溶液,其浓度为0.05mol/L—0.09mol/L.选择何种浓度与样品及薄膜的薄厚有关.选择时,先初步定下某一浓度,如电泳槽两极之间的膜长度为8 cm—10cm,则需电压25V/cm膜长,电流强度为0.4mA/cm—0.5mA/cm膜宽.当电泳达不到或超过这个值时,则应增加缓冲液浓度或进行稀释.缓冲液浓度过低,则区带泳动速度快,并由于扩散变宽；缓冲液浓度过高,则区带泳动速度慢,区带分布过于集中不易分辨.

3、加样量

　　加样品的多少与电泳条件、样品的性质、染色方法与检测手段灵敏度密切相关.作为一般原则,检测方法越灵敏,加样量则越少,对分离更有利.如加样量过大,则电泳后区带分离不清楚,甚至互相干扰,染色也较费时.如电泳后用洗脱法定量时,每厘米加样线上需加样品0.1μl—0.5μl约相当于5μg—1000μg蛋白.血清蛋白常规电泳分离时,每厘米加样线加样量不超过1μl,相当于60μg—80μg的蛋白质.但糖蛋白和脂蛋白电泳时,加样量则应多些.对每种样品加样量均应先作预实验加以选择.

　　点样好坏是获得理想图谱的重要环节之一,以印章法加样时,动作应轻、稳,用力不能太重,以免将薄膜弄坏或印出凹陷而影响电泳区带分离效果.

4、电量的选择

　　电泳过程应选择合适的电流强度,一般电流强度为0.4mA/cm—0.5mA/cm宽膜为宜.电流强度高,尤其在温度较高的环境中,可引起蛋白质变性或由于热效应引起缓冲液中水分蒸发,使缓冲液浓度增加,造成膜片干涸.电流过低,则样品泳动速度慢且易扩散.

5、染色液的选择

　　对醋酸纤维素薄膜电泳后染色应根据样品的特点加以选择.其原则是染料对被分离样品有较强的着色力,背景易脱色；应尽量采用水溶性染料,不宜选择醇溶性染料,以免引起醋酸纤维素膜溶解.

　　应控制染色时间.时间长,薄膜底色深不易脱去；时间短,着色浅不宜区分,或造成条带染色不均,必要时可进行复染.

6、透明及保存

　　透明液应临用前配制,以免冰乙酸及乙醇挥发影响透明效果.这些试剂最好选用分析纯.透明前,薄膜应完全干燥.透明时间应掌握好,如在透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解,太短则透明度不佳.

　　透明后的薄膜完全干燥后才浸入石蜡中,使薄膜软化.如有水,则液体石蜡不易浸入,薄膜不易平展.

例4： P比在电泳中是求的啥

P比应该是磷化膜的P比吧?

磷化膜P比物理意义：代表磷化膜中P组分所占的比率,该值与磷化液的Zn2+含量、材质、磷化方式等因素有关.磷化膜P比可用下式表示：

P比=P／(P+H)式中

P——Zn2 Fe(PO4)2•4H2O的(100)晶面,d(晶面间距)=88.4nm时的x射线衍射强度；

H——Zn3(PO4)2•4H20的(0／20)晶面,d=90.4nm时的x射线衍射强度.

因此,P比=P／(P+H)已不是磷化膜Zn2M(PO4)2·4H2O的含量的直接指示,而是作为特定条件下产生的x射线衍射强度比.但习惯还是作为磷化膜中两种不同物质的比.P比高的磷化膜的耐蚀性、抗石击及磷化膜附着力均好.

例5： 请问电泳仪的使用注意事项有哪些?[物理练习题]

电泳仪/电泳槽注意事项：1.

电泳仪/电泳槽通电进入工作状态后,禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分,也不能到电泳槽内取放东西,如需要应先断电,以免触电.同时要求仪器必须有良好接地端,以防漏电.2.

仪器通电后,不要临时增加或拨除输出导线插头,以防短路现象发生,虽然仪器内部附设有保险丝,但短路现象仍有可能导致仪器损坏.3.

由于不同介质支持物的电阻值不同,电泳时所通过的电流量也不同,其泳动速度及泳至终点所需时间也不同,故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行.4.

在总电流不超过仪器额定电流时(最大电流范围)

,可以多槽关联使用,但要注意不能超载,否则容易影响仪器寿命.5.

某些特殊情况下需检查仪器电泳输入情况时,允许在稳压状态下空载开机,但在稳流状态下必须先接好负载再开机,否则电压表指针将大幅度跳动,容易造成不必要的人为机器损坏.6.

电泳仪/电泳槽使用过程中发现异常现象,如较大噪音、放电或异常气味,须立即切断电源,进行检修,以免发生意外事故.

相关思考练习题：

题1：电泳是什么意思？与电镀的区别？

点拨：电镀就是利用电解原理在某些金属表面上镀上一薄层其它金属或合金的过程。 电泳:溶液中带电粒子（离子）在电场中移动的现象 电镀： 电镀时，镀层金属做阳极，被氧化成阳离子进入电镀液；待镀的金属制品做阴极，镀层金属的阳离子在金属表面被还原...

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点拨：• 电泳原理： 电泳是电泳涂料在阴阳两极，施加于电压作用下，带电荷之涂料离子移动到阴极， 并与阴极表面所产生之碱性作用形成不溶解物，沉积于工件表面。 它包括四个过程： 1 ）电解（分解） 在阴极反应最初为电解反应，生成氢气及氢氧根...

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题5：电泳加工后能耐多高温度

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