细胞培养液

概括：这道题是越仗竟同学的课后生物练习题，主要是关于细胞培养液，指导老师为劳老师。

题目：细胞培养液

培养某一类型细胞没有固定的培养条件.在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长.总之,首选MEM做粘附细胞培养;RPMI-1640做悬浮细胞和人白血病细胞单层培养是一个好的开始,它也广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养,如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞;各种目的无血清培养最好首选AIM V(12005)培养基(SFM).选择细胞的培养基也可以到ATCC上查询,ATCC (American Type Culture Collection) 收集了绝大多数细胞的详细资料.打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库.数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料. 同一种培养基也会因其添加物的不同而应用于不同的细胞培养和不同的实验需求,下面就详细介绍下培养基中各种添加剂的功能.1. L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?是细胞生长的必须氨基酸,为培养的细胞提供重要的能量来源.脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢.L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,降解率随保存温度而变.L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性.2. GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护.一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用.GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解.3. 培养基中丙酮酸钠的作用是什么?丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠.4. Hank′s 平衡盐溶液(HBS)和Earle′s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高.碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值.Eagle′s液在空气水平的CO2 中,溶液会变碱,Hanks′液在CO2培养箱中会变酸.如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagle′s液,.如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks′液就可以了.5. 培养液pH对细胞生长的影响?由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响.但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强.但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些.在配制培养用液时,需要注意一点：培新配的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右.6. 培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?答：一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度.当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g 时,则应使用5%CO2培养细胞.7. Hepes的作用HEPES溶液：是一种弱酸,中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培养基pH迅速变动.在开放式培养条件下,观察细胞时培养基脱离了 5%CO2的环境,CO2气体迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此时可以维持pH7.0左右.一般在进行克隆化培养时要添加HEPES.神经细胞原代培养的过程中能用到8. NaHCO3培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统,并采用开放培养,使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶,再通过稳定调节温箱中CO2浓度(5%),与培养基中的NaHCO3处于平衡状态,从而调节培养基的PH值.9. NEAA：非必须氨基酸NEAA(非必需氨基酸)是含几种非必需氨基酸的合剂,添加到的原培养基不同,NEAA也有不同的种类,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、 L-Aspartic Acid、L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine.10. 氯化钙氯化钙对成骨细胞培养有毒性,所以成骨细胞的培养基中应不含氯化钙.11. 什么培养基中可以省去加酚红?酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色.酚红本身对生物制品质量并不会产生影响,可以通过纯化技术去除,但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长,当然这种作用能被血清所中和或减轻.酚红并不是培养基中必需的一种成分,很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基.研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素).为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基.由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基. 你可以到生物帮那里详细的了解一下,那里有介绍的,如果有问题,那里还有在线交流核心版块,可以帮助你找到答案,看看 www.bio1000.com/zt/cell/45828.html 会有帮助的.

参考思路：

可以搜易一下

举一反三

例1： 细胞实验里的培养基加巯基乙醇的作用是什么[生物练习题]

“巯基乙醇2-Me 对细胞生长有很重要的作用.有人认为它相当于胎牛血清,有直接刺激细胞增殖作用.2-Me的活性部分是硫氢基,其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽,能诱导细胞的增殖,为非特异性的激活作用.同时避免过氧化物对培养细胞的损害.另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA 合成,增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用,已广泛应用于杂交瘤技术,另外,也开始用于一些难以培养的细胞.”

转自丁香园.

那玩意的气味.永生难忘啊.

例2： 细胞培养液主要成分是什么?我也想培养细胞[生物练习题]

你这个问题问得太大.没有讲清楚培养什么细胞.

培养植物细胞要用组织培养液.不同植物要求不同.

养动物细胞也有区分.如果养哺乳动物细胞一般需要小牛血清和特定的培养基.而且也需要CO2培养箱等设施.

养酵母的话,一般的酵母发酵液就可以了.

例3： 酚红在细胞培养液中的作用?[生物练习题]

监检培养液中的PH变化.

例4： 细胞培养基与常规细菌培养基的区别[生物练习题]

细胞生长要求更高,要求培养基包括生长因子,氨基酸,葡萄糖等营养成分,而细菌的主要营养成分就是蛋白胨,通过自身分解蛋白供能,而且细胞的生长培养基对pH要求更高.

例5： 使用浓度为2.5μg/ml,作用于常规的细胞培养基（1000×稀释）.每毫升培养基加多少啊?

1μL

相关思考练习题：

题1：细胞培养液如何储存，需要注意什么

点拨：细胞培养液的储存方法： 细胞培养液的储存条件一般为2～8℃、密闭、避光保存，但要注意如下几点： （1）过滤后的完全培养液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用，一般在2～3周内使用完。 （2）灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂...

题2：在细胞培养液中加入血清的有哪些作用

点拨：培养细胞用的培养基为人工合成，但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有： 1、提供基本营...

题3：动物细胞培养液的主要成份与植物组织培养培养基的...

点拨：植物组织培养基的成分主要是水，蔗糖，矿质营养-无机盐，植物激素和琼脂等。。。通常属于固态培养基。动物细胞培养液是液态培养基，主要成分是水，糖类-葡萄糖，无机盐，生长因子和动物血清等。动物血清可以提供现在还不知道的必不可少的营养物...

题4：细胞培养时培养液出现浑浊这是什么原因

点拨：培养基变浑浊的原因可能有如下几点： 1、细胞存在污染，污染早期可以见到细胞生长； 2、不排除传代时细胞密度过大，或者操作不当导致多数细胞不贴壁，大量细胞漂福 3、细胞破碎。 细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染...

题5：细胞培养液中需要加入的双抗的浓度一般是多少

点拨：青霉素80万u+pbs 4ml,链霉素100万u+pbs 5ml,各自混匀后，再一起混匀，过滤分装在9个 1ml EP管中，放在-20度，配1升培养基时加1ml,或者按这个比例临时加。 双抗就是青链霉素混合液，青链霉素混合液(100X) (Penicillin-Streptomycin Solution）双...